产品货号:
GS0061
中文名称:
酵母基因组DNA快速提取试剂盒
英文名称:
Rapid Yeast gDNA Isolation Kit
产品规格:
50次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。从2mL酵母菌液可以获得5~10μg DNA,OD260/OD280比值一般为1.7~1.9之间。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。
组分 | 50次 | 100次 |
Buffer Digestion | 24mL | 48mL |
Buffer PY | 12mL | 24mL |
TE Buffer (pH8.0) | 10mL | 20mL |
Snailase Reaction Buffer | 60mL | 120mL |
Snailase Storage Buffer | 5mL | 10mL |
Snailase | 600mg | 1200mg |
保存:室温,其中Snailase需置于-20℃保存。
Buffer Digestion中含有刺激性化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
- 自备材料:水浴锅、小型高速离心机(最大离心力≥ 12000×g)、1.5mL离心管、75%乙醇、异丙醇、β-巯基乙醇等。
- Buffer Digestion在低温下可能产生沉淀,使用前请检查,如有沉淀,请于65℃溶解沉淀后使用。
- Snailase比较难溶解,请提前将Snailase加入Snailase Storage Buffer,涡旋混匀使酶溶解,如溶解不完全,可以将
- Snailase置于冰箱4℃过夜溶解。待完全溶解后分装,-20℃冰箱保存备用。
- 提前将水浴锅调至65℃备用。
- 细胞和细胞核的裂解:取1~2mL过夜培养的酵母菌液,加入1.5mL离心管中,室温10000rpm离心1min,弃上清,收集菌体。
- 1mL过夜培养的酵母培养物离心收集,湿重约为20mg。
- 酵母细胞壁的去除:按每20mg菌体湿重取600μL Snailase Reaction Buffer加入步骤1中的离心管,同时加入2.4μL β-巯基乙醇和50μL实验前准备好的Snailase,37℃水浴3h。室温10000rpm离心2min,弃上清。
- 酵母细胞壁结构坚韧,若想破壁完全,可以增加Snailase的用量或延长破壁时间,可以37℃水浴过夜。
- 加入400μL Digestion Buffer,震荡混匀。65℃水浴1h至细胞完全裂解。
- 水浴过程中,每10min颠倒混匀一次,可促进样品裂解。
- 如需得到无RNA的DNA,可在水浴后加入20μL的RNase A(10mg/mL),室温放置2~5min。
- 水浴过程中,每10min颠倒混匀一次,可促进样品裂解。
- 加入200μL Buffer PY,充分颠倒混匀,-20℃冰箱放置5min。
- 室温10000rpm离心5min,将上清液(约500~550μL)转移到新的1.5mL离心管中。
- 若上清液混浊,可再加入等体积氯仿混匀,12000rpm离心取上清。
- 加入等体积的异丙醇,颠倒5~8次使之混匀,室温放置2~3min。室温10000rpm离心5min,弃上清。
- 加入1mL 75%乙醇,颠倒漂洗1~3min,10000rpm离心2min,弃上清。
- 漂洗时一定要使沉淀悬浮起来。
- 重复步骤7一次。
- 开盖室温倒置5~10min至残留的乙醇完全挥发。
- 此步绝不可省略,否则残余的乙醇会严重影响后续实验。
- 如果残留的乙醇有挂壁现象,倒掉液体后再短暂离心,将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置5~10min至残留的乙醇完全挥发。
- 此步绝不可省略,否则残余的乙醇会严重影响后续实验。
- 得到的DNA用50~100μL TE Buffer溶解。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
- TE Buffer为10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH8.0。
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